СЕРОДИАГНОСТИКА

СЕРОДИАГНОСТИКА, постановка диагноза на основании исследования свойств сыворотки крови. Этот диагностический метод основан на присутствии в сыворотке крови антител (аглю – ; тинины, опсонипы, комплемент-связывающие \ вещества и т. п.) и построен на явлениях имму – i нитета в смысле специфичности. В зависимо – . сти от характера имеющихся в сыворотке ан – I тител меняется методика серологических ис – ! следований. Раньше все виды антител рассматривались как совершенно самостоятельные и независимые друг от друга; в наст.’ время преобладает унитарный взгляд на антитела, различия же в проявлении их действия ставят в зависимость от различия формы применяемого in vitro антигена и методики опыта. Начало С. было положено классическими опытами Пфей-фера (Pieiffer, 1894) (см. Пфейфера феномен). который указал новые пути идентификации бактерий с помощью известных антител. Грубер и Видаль (Gruber, Widal, 1896) применили обратный принцип и по известному антигену определяют неизвестные антитела в заболевшем организме. К С. в широком смысле можно отнести определение как неизвестного антигена по известному антителу, так и обратно—установление неизвестного антитела по. известному антигену. Принцип Грубер-Видаля определе – ния содержания неизвестного антитела в исследуемой сыворотке является основой С. в более узком смысле; реакции, построенные на этой основе, составляют собственно клин. С. Антитела, возникшие в организме под влиянием заболевания или искусственной иммунизации вакцинами, сохраняются в организме неопределенное время; затем количество их уменьшается, и они могут совсем исчезнуть, однако они сновамогут появиться под влиянием различных интеркурентных факторов (инфекция, травма), но сравнительно в небольшом количестве. Необходимо также считаться с наличием в нормальных сыворотках небольшого количества нормальных естественных антител. Поэтому серодиагностические реакции приобретают клин, значение только при количественном титровании. Так напр. реакцию Вида-ля можно считать клинически положительной при разведении сыворотки 1: 50; реакцию Райта при бруцелезе—в разведении 1:100, агглютинация же в более крепких разведениях 1/10—• 1/25 клинически не может считаться положительной. Количественные определения в С. приобретают еще большее значение в связи с наличием в сыворотке наряду с главными специфическими антителами второстепенных групповых антител для родственных видов антигена, титр которых обычно ниже титра главных антител. Так, при брюшном тифе можно обнаружить в сыворотке наряду с брюшнотифозными также и паратифозные аглютинины. Несмотря на разнообразие серодиагн’ости-ческой методики нек-рые положения общи для всех видов исследований. Так, уже упомянутая количественная постановка с падающими дозами сыворотки дает возможность исключить влияние на результат исследований групповых и нормальных антител. В нек-рых же случаях в крепких разведениях сыворотки можно наблюдать феномен «торможения»; так, при аглютинации культуры Вас. abortus Bang меж-но наблюдать отсутствие аглютинации в разведениях \и01/80, а в разведениях 1/1601/,20 и выше реакция может быть положительной. Все серодиагностические реакции наступают только при наличии солей, т. е. в электролитной среде. Обычно применяется 0,85%-ный физиол. раствор хлористого натрия. Гипертонические растворы тормозят реакцию. Оптимальная t° реакции 37°. Серодиагностические реакции протекают как коллоидно-хим. реакции между двумя коллоидными системами. Основным в серодиагностических реакциях является взаимодействие между антигеном и антителом. Согласно более ранним воззрениям Эр-лиха природа этого взаимодействия—хим. характера; по новейшим взглядам — физико-химического. Применяемый для С. антиген в некоторых случаях неспецифйчен в иммуно-биол. смысле и не связан с возбудителем заболевания; таковы напр. экстракты для С. сифилиса; культура Proteus Х19 в реакции Вейль-Феликса при сыпном тифе; несмотря на неспецифичность антигена сёрореакции в этих случаях специфичны по своему клин, значению. Значение серологических методов не ограничивается только областью клиники; в виду сохранения антител в сыворотке и после выздоровления, а также их возникновения при скрытых формах инфекции можно с помощью серодиагностических реакций обнаружить очаги прежде бывших заболеваний, а также скрытых носителей инфекций. Отсюда значение. С. в эпидемиологии. Виды серологических реакций. 1. Бактериолиз не нашел широкого применения in vitro; in vivo изв
естен как феномен Пфейфера. 2. Преципитация: 1) со специфическим антигеном—бактериопреципитация—■ не получила широкого применения в клин. медицине; в ветеринарной практике имеет большое применение при распознавании сибирской язвы—термопреципитация Асколи (см. Асколи-Валенти реакция); преципитация со специфическим белком имеет большое значение в судебной медицине (см.); 2) с неспецифическим антигеном: а) преципитатные (осадочные) реакции (см. Преципитация) играют большую роль в С. сифилиса; б) в последнее время описана меланопреципитация при малярии. 3. Оп-сонины (см.) практически мало применяются. 4. Аглютинация нашла широкое применение в клин. С. при разнообразных заболеваниях; применяется 1) с возбудителем заболевания: а) реакция Видаля при брюшном тифе и паратифах, б) реакция Райта при бруцелезе, в) реакция аглютинации при туляремии, г) отчасти при бацилярной дизентерии, д) при инфекционной желтухе Вейля, е) при споротри-хозе; 2) парааглютинация с сопутствующими бактериями: а) реакция Вейль-Феликса с Proteus Х19. 5. Реакция связывания комплемента: 1) со специфическим антигеном: а) при гонорее, б) при бруцелезе, в) при рино-склероме, г) при tbc, д) при эхинококковых заболеваниях—реакция Вейнберга, е) при сапе в ветеринарной практике; 2) с неспецифич. в иммунологическом смысле антигеном; из последних наибольшее клин, значение имеет реакция Вассермана (см. Вассермана реакция). 6. Р е акци я Абдергальдена и ее разнообразные модификации как методы диализа, поляриметрии, интерферометрии, реакция Лгот-ге-Мерца для определения так наз. «защитных» ферментов (Abwehrfermente) против клеток организма. 7. К серодиагностическим методам можно отнести также определение кровяных групп у человека (подробнее см. отдельные реакции). д. Боровекая. Серодиагностическое определение систематического положения организмов. В основе серо-диагностического метода определения систематических отношений между организмами лежит положение о видовой специфичности белков. Вытяжка (содержащая белки) из тканей одного из сравниваемых организмов вводится морской свинке или кролику в расчете на образование специфических антител. Сыворотка иммунизированного таким образом кролика смешивается с тканевой вытяжкой другого из сравниваемых организмов. Наличие преципи-тиновой реакции (осадка) говорит в таком случае в пользу родственности сравниваемых организмов, отсутствие осадка указывает на отсутствие систематической близости. Степень родства определяют количеством выпавшего осадка. Серодиагностический метод применялся как к животным, так и к растениям. В частно-’ сти таким путем можно констатировать систематическую «близость человека и высших обезьян. Для растений методом С. было построено целое эволюционное дерево, в нек-рых отношениях резко отличающееся от дерев, построенных на основании сравнительноморфол. исследований. Наряду с результатами, подтверждающими систематическое родство, обнаруженное иными путями, метод С. подчас приводит к явно нелепым выводам. Поэтому вме – сте с дальнейшим использованием этого метода необходима углубленная его разработка и строго критическое отношение к получаемым результатам. Серодиагностика при беременности. С. беременности основана на выявлении особенностей. к-рыми обладает сыворотка крови беременной женщины, для разрешения чрезвычайно важного в практическом отношении вопроса—для достоверного определения ранней беременности. Эта задача казалась разрешенной, когда Абдергальден предложил серологическую реакцию, которая в наст, время носит его имя (см. Абдергальдена реакция). Еще раньше того Фей-ту (Veit) удалось доказать, что сыворотка беременной женщины расщепляет ворсинки последа при помощи особых веществ, названных им синцитиолизинами. С целью улучшить результаты реакции Абдергальдена и устранить погрешности в технике, требующей безусловно самого тщательного выполнения, были предложены различные видоизменения оригинального метода. Прежде всего казалось необходимым устранить диализационные гильзы, к-рые по заключению нек-рых авторов могут служить источником неточных результатов реакции. В виду этого Недригайлов предложил пропитывать антиген кармином и судил о расщеплении белка по окраске сыворотки, к-рая вместе с антигеном помещалась в пробирке на 24 часа в термостат. Котман (Kottmann), производя реакцию Абдергальдена, пользовался антигеном, представляющим собой соединение пляцентарного белка с железом («Sorcym»). При расщеплении белка сывороткой освобожденное желез
о может быть определено в фильтрате цветной реакцией с НС1 и роданистым калием. По Здродовскому в термостат помещаются три пробы: антиген с сывороткой, одна сыворотка, антиген с дест. водой. Фильтрат каждой пробы титруется по нингидрину. Результат опыта оценивается разницей между титром первой пробы и суммой | титров остальных двух контрольных проб. Т. к. i при расщеплении антигена сывороткой уд. в. S последней увеличивается, Е. Краснушкин предложил определять как уд. в. сыворотки, воздействовавшей на антиген, так и уд. в. сыворотки контрольной без антигена. С этой целью капля исследуемой сыворотки вносится в смесь хлороформа и бензола. В зависимости от тяжести сыворотки помещенная в эту смесь капля сыворотки или поднимается, или опускается, или взвешивается посреди-жидкости, если уд. в. жидкости и сыворотки одинаков. Приготовив смесь хлороформа и бензина такого состава, чтобы капля контрольной сыворотки находилась посредине этой жидкости, опускают в последнюю каплю сыворотки, находившейся в соприкосновении с антигеном. Сравнивая положение обеих капель, судят об изменениях уд. веса сыворотки. Наконец Лютге и Мерц предложили очень удачное упрощение реакции Абдергальдена. Пробирку с исследуемой сывороткой и субстратом из пляценты помещают на 24 часа в термостат. По истечении этого срока в пробирку наливают 10-кратное количество 96%-ного алкоголя. Белки сыворотки свертываются в виде густой массы; затем пробирку в течение короткого времени кипятят на газовой горелке. Содержание пробирки фильтруют. Фильтрат кипятят одну минуту, добавив 0,2 см? 1%-ного спиртового раствора нингидрина. При поло – 83© жительном результате получается фиолетовое окрашивание. По Лютге и Мерцу реакция в 98,7% дает правильный ответ. Другие авторы, работавшие по методу Котмана, Здродовского, также получили безошибочный результат почти в 100%. Однако большинство авторов помощью оригинальной реакции Абдергальдена и ее модификаций не получало безусловно правильного ответа. Вопрос о неспецифичности реакции остается все же неразрешенным. Абдергальден сам отмечает, что сыворотки, взятые от б-ных, имеющих воспалительные процессы, не подходят для производства реакции, т. к. положительный ответ с ними получается всегда. Не следует забывать также, что многие сыворотки и без субстрата реагируют положительно с нингидрином и таким образом реакция с ними произведена быть не может. Все это в значительной степени понижает значение реакции Абдергальдена и лишает ее практической ценности. Гирш (Hirsch) видоизменил реакцию Абдергальдена, пользуясь Леве-Цейсовским интерферометром. Помощью этого аппарата является возможным точно установить концентрацию двух жидкостей и улавливать малейшую разницу. Если воздействовать сывороткой, содержащей «защитный» фермент, на соответствующий субстрат, то концентрация сыворотки должна повыситься благодаря переходу в раствор продуктов расщепления. Это повышение концентрации устанавливается интерферометром при сравнении той же-сыворотки, но без субстрата. По предложению Гирша субстрат изготовляется в виде стерильного порошка, названного им «опцим» (фирма «Pharmagans»). К 0,5 г исследуемой сыворотки прибавляется 5 мг субстрата пляценты и раствор Vucinum bihy-drochlor. Пробирка герметически закупоривается и ставится в термостат на 24 часа с контрольными пробирками, содержащими 0,5 см3 той же сыворотки, но без субстрата. Обе контрольные сыворотки в конце исследования сравниваются друг с другом и должны дать полное совпадение полос интерференции. Сыворотка, к-рая находится в соприкосновении с субстратом, центрифугируется, исследуется интерфе-рометрическим путем и сравнивается с контрольной сывороткой. Ряд ошибочных данных при производстве этой реакции дал основание для критической оценки этого метода. Штрек (Streck) установил, что предполагаемое «расщепление» происходит как в термостате, так и при комнатной t°». Ряд авторов установил, что изменение в концентрации получается как при пользовании специфической, так и неспецифической (небеременной) сывороткой с сывороткой, инактивированной путем нагревания. Штрек установил также, что на результаты реакции громадное влияние оказывают строение порошкообразного субстрата, величина его частиц. Мелкозернистый порошок давал явления низкого, крупный—высокого расщепления. Кюстер и Коулен (Krister, Koulen), внеся ряд сложных изменений в ход этой модификации реакции Абдергальдена, должны были признать, что это только пути к улучшению, а не устранение недочетов
этого метода. Клеезаттель (Kleesattel) указывает, что хорошие результаты, полученные определенными авторами, объясняются тем, что ими мало обслуживались случаи, где беременности не было; чем больше брать таких случаев, тем больше обнаруживается неудач. Неточность, дорого стоящий ап – парат, сложность методики лишают этот метод серьезного значения. В дальнейшем Лютге и Мерц выработали новую серологическую реакцию и вместо субстрата предложили применять особо приготовленные экстракты из органов, resp. пляценты. Это т. н. алкогольно-экстрактная реакция (AER), которая производится без термостата. К 1 см3 сыворотки добавляется 1 см3 экстракта из пляценты; после основательного встряхивания добавляют 10 см3 абсолютного спирта. Смесь фильтруют; фильтрат кипятят 1 минуту и к нему прибавляют 0,2 см31 %-ного раствора нингидрина и 1 каплю НС1. В случае положительного результата жидкость немедленно или после остывания приобретает фиолетовую окраску. По Лютге и Мерцу в 98,7% получается правильный ответ. Другими авторами это однако не подтверждается. Попытки улучшить эту реакцию успеха почти не имели. Сущность реакции мало выяснена. Как указывает Мандельштам, продукты, получаемые при реакции Абдергальдена, равно как и экстракты, употребляемые при алкогольно-экстрактной реакции, низко молекулярны, а при воздействии сыворотки на экстракты получаются вещества высоко молекулярные. На основании этого Мандельштам приходит к выводу, что при алкогольно-экстрактной реакции разложению подвергается не экстракт, а сыворотка. Это следовательно особая реакция, совершенно отличная от реакции Абдергальдена. Более правдоподобное объяснение алкогольно-экстрактной реакции дает Шмидт, к-рый полагает, что на ход этой реакции оказывают влияние соотношения в сыворотке альбуминов и глобулинов, содержание холестерина, концентрация ионов. Проделав наряду с алкогольно-экстрактной реакцией реакцию осаждения эритроцитов, Шмидт установил, что при скорости оседания эритроцитов меньше 30 минут реакция дает больше ошибочных заключений. Это с большой вероятностью подтверждает предположение о значении физ.-хим. состава сыворотки при оценке результатов алкогольно-экстрактной реакции. В равной степени это относится и к другим реакциям, напр. к реакции по Динсту (Dienst), к-рая состоит в определении антитромбина, находящегося в виде метатромбина, т. е. в состоянии, связанном с тромбином. Прибавление щелочи нарушает эту связь, и освобожденный антитромбин может быть обнаружен биурето-вой реакцией или помощью нингидрина. Работы многих авторов показали, что этот способ не может быть использован для диагностики беременности, т. к. цветные показатели, характерные, по Динсту, для беременности, очень часто встречаются у небеременных, у мужчин. Аналогичные результаты получены также при проверке реакции VogePfl. В этой реакции сыворотка крови разбавляется стандартным щелочным раствором и кипятится с раствором нингидрина. По Vogel’ro в сыворотке беременных женщин при этом белок оказывается в виде суспенсии и едва заметных хлопьев синего цвета. У небеременных белок выпадает в виде грубых хлопьев серо-белого цвета, отчетливо выделяющихся в жидкости, окрашенной в синий цвет. По Яковлеву реакция по Vogel’io не может служить для распознавания беременности, так как наличие или отсутствие окраски, одинаковый характер хлопьев встречаются как у беременных, так и у небеременных. Желая избежать сложной и тщательной техники при производстве алкогольно-экстрактной реакции, Мерц предложил новую серологическую реакцию для определения беременности, к-рая отличается большой простотой и по его данным дает очень хорошие результаты. К 1 см3 сыворотки прибавляется 1 см3 раствора фосфорно-вольфрамовой к-ты (2,8 г на. 1 л воды); спустя V2 часа в случае беременности получается помутнение. Спустя еще 1/2 часа прибавляют 2—3 капли BromphenolbTau. В случае беременности получается светлоголу-бое окрашивание, переходящее в зеленое, и раствор не пропускает света; при отсутствии беременности окраска синяя и раствор прозрачен.—Шмидт при этой реакции получил правильный ответ в 92%. Необходимо однако повторное исследование, т. к. нет оснований считать эту реакцию более точной, чем напр. реакцию Vogel’fl, несостоятельность которой вполне доказана.—Реакция, предложенная Мануйловым (к 0,3 см3 сыворотки прибавить 1 см3 2%-ного раствора диуретина и каплю 0,2%-ного спиртового раствора Nilblau—у беременных спустя нек-рое время получается желтое, розовато-желтое окрашивание; у небеременных— син

Изучайте:

  • ГАЛЕНОВЫЕ ЛАБОРАТОРИИ
    ГАЛЕНОВЫЕ ЛАБОРАТОРИИ,специально оборудованные лаборатории для массового изготовления Галеновых препаратов (см.). После...
  • ABRAXAS
    ABRAXAS (священное слово или «благословенное имя»), каббалистическое слово, выражающее по цифровому значению греч. букв...
  • ЛЕКЦИЯ
    ЛЕКЦИЯ (от лат. lectio—чтение), форма изложения знаний через связную, б. или м. длительную речь лектора (в прежнее врем...
  • СТРАШУН
    СТРАШУН Илья Давыдович (род. в 1892 г.), деятель по высшему мед. образованию в СССР, врач, член ВКП(б). По окончании ме...
  • СЕНСИБИЛИЗАЦИЯ
    СЕНСИБИЛИЗАЦИЯ (от лат, sensibilis — чувствительный), повышение реактивной чувствительности клеток и тканей. Понятие С....