ВАССЕРМАНА РЕАКЦИЯ
Спасибо нашим инвесторам из казино онлайн
ВАССЕРМАНА РЕАКЦИЯ
. Проблема серо-диагноза сифилиса трактуется во всемирной литературе с 1906 г., когда Вассерма-ном вместе с Нейсером и Бруком (Neisser, Bruck) была предложена реакция, которая получила его Имя. По этому вопросу скопился огромный литературный материал, созданный работой около 1.800 исследователей всех стран мира, поставивших, в общем, не менее 4 миллионов опытов. Процесс, вызываемый внедрением бледной спирохеты в организм человека или животного, является общим; спирохеты обнаруживаются в сосудах (как лимфатических, так и кровеносных) наиболее важных паренхиматозных органов (селезенки, печени, сердца, костной и нервн. системы, а также эндокринного аппарата); цитологически отмечается лимфоцитоз с глубоким нарушением основных ферментативных процессов, влекущим за собой полное извращение белкового и, особенно, липоидного обмена клеток. Последствием этого глубокого влияния спирохеты и являются особые свойства сифилитич. сыворотки, отличающие ее от так наз. нормальной сыворотки и лежащие в основе се-рореакций на сифилис.—Особенности сифилитической сыворотки следующие: I. X и м. свойства ее коллоидов (белков и липоидов) таковы: а) увеличенное количество глобулинов и липоидов; б) изменение качества глобулинов: 1) меньшая устойчивость их коллоидных растворов в виду ослабления связи с окружающей кристаллоидной средой, а следовательно, и легкая осаждае-мость (под влиянием экстракт-липоидов
t
холестерина, алкоголя, ацетона, сернокислого аммония, молочной кислоты, формола, концентрированного NaCl, коллоидного золота и т. д.); 2) термостабильность (большая часть), т. е. выпав из раствора, глобулины не растворяются при 37°,—в противовес глобулинам нормальной сыворотки, к-рые по выпадении из раствора снова растворяются (термолабильность) при 37° через 2—18 ча-еов; 3) т. н. активная кислотность (опреде-лявхмая концентрацией свободных ионов Н и ОН) ниже, чем в нормальной сыворотке. П. Физич. свойства сифилитической сыворотки: а) дисперсность коллоидов (т. е. раздробленность их частиц) уменьшена; частицы, видимые только ультрамикро-скопически, грубее, крупнее и распределены в виде аггломератов (т. е. предсущест-вует преципитат); б) поверхностное напряжение и вязкость повышены; в) вращение плоскости поляризации увеличено; г) автотроп-ность, т. е. сумма гемолизирующей и анти-гемолизирующей способности, увеличена; это свойство ослабляется при голодании (Фин-келынтейн) и подогревании до 60° (Neufeld); д) все серореакции протекают быстрее и закономернее в «момент возникновения> (in statu nascendi); e) физ.-хим. состояние ее приобретает несколько ббльшую устойчивость при подогревании (*/, ч. при 37°— инактивирование). III. Электро-физи-ческие свойства: глобулины (их коллоидные частицы—мицеллы) электро-поло-жительны, в противовес глобулинам нормальной сыворотки и липоид-экстрактам, которые электро-отрицательны. Исходя из приведенных свойств сифилитической сыворотки, можно объяснить и все серореакции на сифилис. Различают 1) собственно реакцию Вассермана (RW) и ее модификации, 2) реакции флокуляции (реакции Закс-Георги, Д. Мейнике, Канаидр.). Сущность реакций одна и та же, но способ выявления иной. Общим в методике всех реакций на сифилис является прибавление к сифилитической сыворотке т. н. экстракта-антигена, к-рый готовится различно при разных реакциях и потому обладает большей или меньшей активностью или чувствительностью, а также физ.-хим. индивидуальностью (Aviditat). При RW антигены малоактивны, дают с сифилитической сывороткой весьма ничтожные (субвизибельные) осадки, различаемые только ультрамикро-скопически и выявляемые макроскопически—с помощью т. н. гемолитич. системы, являющейся в данном случае лишь макроскопическим индикатором (см. схемы). При собственно флокуляционных реакциях (реакции Закс-Георги, Кана и
т.
д.) антигены очень чувствительны, дают с сифилитической сывороткой макроскопически видимые осадки (простым глазом или лупой) и, таким образом, обнаруживаются без содействия гемолитической системы. Общим для всех реакций на сифилис является возникновение преципитата, который при RW адсорбирует (поглощает) комплемент и таким образом препятствует растворению эритроцитов гемолитической системы, а при других реакциях этот флокулят является непосредственным макроскопическим выражением положительной реакции. Движущая сила при всех этих реакциях (RW, флокуляции) одна и та же: возникновение электрического тока при взаимодействии положительно заряженных частиц сифилитической сыворотки с отрицательно
заряженными частицами липоид-экстрактов и, как последствие электрического разряда, выпадение осадка; при нормальных сыворотках, заряженных отрицательно и смешанных с, отрицательно заряженным экстрактом, нет возникновения тока, нет и флокулята, т. е. получается отрицательная серореакция. Эта физ.-хим. теория удовлетворительно объясняет нам все особенности течения всех реакций на сифилис, а также и сущность т. н. неспецифических, реакций при туберкулезе, малярии, опухолях, лепре и т. д., при которых в сыворотке б-ных имеются физ.-хим. изменения, близкие к наблюдаемым при сифилисе, но в меньшей напряженности. Т. н. амбоцепторная теория RW в наст, время защищается только немногими исследователями; это касается как первоначальной, собственно антиспирохетной теории, так и позднейшей, выдвинутой В. как корректив,—т. н. аутоантилипоидной теории. Последняя теория базируется на избыточном накоплении липоидов в организме сифилитика под влиянием распада лимфоцитов как последствия токсического влияния бледной спирохеты; в ответ на это организм, .реагирующий на избыточные липоиды как на посторонние тела, вырабатывает антилипоидные амбоцепторы. Последняя теория не объясняет всех особенностей серореакции и потому, вместе с антиспирохетной теорией, интересна лишь как рабочая схема, удобная для первого стадия ознакомления с серодиагностикой сифилиса. Прилагаемые две схемы, построенные по типу амбоцепторному, поясняют ход положительной и отрицат. реакции Вассермана. Положительная RW (схема 1). Люэтический экстракт (липоид-экстракт, органный экстракт)+сифилитическая сыворотка (син.: люэтический амбоцептор, ан-тилипоидный амбоцептор, Вассермановский субстрат) + комплемент (свежая сыворотка морской свинки); эта смесь выдерживается 3/4—1 час в термостате, в результате чего образуется замкнутая антигенно-амбоцеп-торная система, т. к. в специфическую реакцию между антигеном и амбоцептором вовлекается также комплемент (resp., адсорбируется образующимся при этом преципитатом) и, т. о., исчезает из раствора. Затем прибавляется гемолитическая сыворотка кролика (иммунизированного бараньими эритроцитами) с бараньими эритроцитами. Вся эта смесь, состоящая из пяти ингредиентов, ставится опять в термостат на 1 час. В результате этого опыта бараньи эритроциты остаются нерастворенными, вследствие отсутствия свободного комплемента, что и обозначается как положительная RW. Антигенно – амбс-цепторная система замкнута Spiroch. pallida Lues-Extract Antigen Lues-Serum Вассермановский субстрат Гемолитическая система не за – Комплемент Гемолитическая сыворотка Бараньи циты
Глобулины Липоиды
>Вассерм. аггрегат Комплемент Осадок бараньих шариков Липоиды Глобулины Комплемент Схема 1. Реакция Вассермана положительная (+). В помещенной здесь схеме 1 виден ход реакции и ее результат в пробирке, где в осадке, помимо бараньих эритроцитов, имеются, согласно физ.-хим. теории, как липоиды экстракта, так и глобулины сифилитической сыворотки, а также и увлеченный (адсорбированный) комплемент (недеятельный по отношению к гемолитической системе). Положительная RW имеет свои градации, укладывающиеся между полным отсутствием гемолиза и постепенно нарастающим гемолизом, доходящим до полного гемолиза (т. е. отрицательной реакции). Градации эти обозначаются следующим образом: + + + + 1 > = положительная реакция + + + I + + — слабо-полошительная реакция ± — неопределенная реакция — » отрицательная реакция. Градации эти, зависящие от полной или частичной адсорпции комплемента, имеют некоторое, хотя и относительное, практическое значение как критерий постепенного ослабления напряжения того физ.-хим. состояния сыворотки, к-рое характерно для сифилитического процесса. Отрицательная RW (схема 2). В этой схеме, где, вместо сифилитической сыворотки, схематически изображена нормальная сыворотка, ход и результат реакции иной: получается полное растворение эритроцитов, так как в первой фазе опыта комплемент не используется (не адсорбируется); он остается свободным, активным и потому замыкает во втором стадий опыта гемолитическую систему, в результате чего и получается указанный гемолиз эритроцитов (отрицательная RW). Основы методики RW и ее уни-фикация. Из приведенной схемы видно, что В. р. складывается из пяти ингредиентов: сифилитической сыворотки, антигена (экстракт), комплемента, гемолитической сыворотки для бараньих эритроцитов и ба^ раньих эритроцитов. Чтобы получить специфический ход реакции, все эти ингредиенты должны быть проверены в смысле качества, введены в реакцию в определенной последовательности и определенных количественных отношениях, для чего ставится целый ряд предварительных контрольных опытов. В виду сложности и скрупулезности этой «коллоидной реакции», а также неполной еще законченности ее методики, было предложено много «модификаций» для. ее упрощения и уточнения. Таким образом, постепенно создалась большая техническая литература (около 600 работ), в к-рой одновременно наметилось течение в сторону стандартизации (унификации) методики RW как в смысле самой ее постановки, так и изготовления входящих в нее ингредиентов, что было необходимо для выравнивания расхождения в получаемых результатах при неодинаковой методике. Унификация серодиагностики сифилиса в целом (т. е. не только RW, но и других серореакций) как вопрос большой практич. важности была предметом обсуждения целого ряда совещаний как в Зап. Европе (Париж, Лондон, Копенгаген), так и в СССР (серологические совещания при съездах бактериологов и венерологов в Ленинграде, Москве, Харькове, Одессе). В результате этих совещаний в СССР выработана серологическая инструкция, к-рая была предложена к проверке на массовом материале. Эта инструкция, согласно данным всероссийской проверочной анкеты, проведенной в 1928 г. Центральной серологической комиссией НКЗдрава РСФСР и базирующейся на 400.000 исслет-дованиях, поставленных в 70 лаборатории ях, дала, в общем и целом, удовлетворительные практические результаты в смысле Spiroch. Dallida} уая^ Lues-Extract } Lipoid Antigen J Нормальная сы – - воротка Гемолитическая цепь замкнута Комплемент I/N Гемолитическая _. сыворотка Бараньи эритроциты ^ нет Вассерман. аггрегата Термолаб. Глобулин >Гемолиэ Схема 2. Реакция Вассермана отрицательная (—). совпадения с клиникой. В ней подчеркнута необходимость параллельной постановки наряду с RW и реакций флокуляции (Закс-Георги, Кана, Мейнике). Основные п о л о же н и я с е р о логической и нструкции.—П остановка RW. 1. Реакция должна ставиться с тремя антигенами, полученными из центральных лабораторий (один специфический); ставится с половинными дозами, в общем объеме 2х/г куб. см – 2. Гемолитический амбоцеп-тор, получаемый путем иммунизации кроликов бараньими эритроцитами, должен иметь титр не меньше, чем 1 : 1.200, т. е. 0,5 куб. см его в разведении 1:1.200 должны растворять 0,5 куб. см эмульсии (5%) баран. эритроцитов в присутствии 0, 5 куб. см комплемента (в разведении 1 : 10), в течение 1 часа при 37° в термостате. 3. Комплемент (свежая сыворотка морских свинок) употребляется в виде смеси (не меньше, чем 5 частей спирта; встряхивание в Schflttel-аппарате (по Sachs’y)- 9. Способ подгот