БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ
Спасибо нашим инвесторам из казино онлайн
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ
, ыи – кробиологич. анализ, служит для обнаружения различного рода микроорганизмов и определения их вида в подлежащем обследованию материале (в почве, воде, продуктах разного рода, отделениях животных и т. д.); состоит в изучении биологии микроба (его морфологических, биолог, и иммунологических свойств), а для патогенных микробов также и в определении их способности вызывать у экспериментальных животных специ-фич. пат. процессы. Изучение морфологии микробов производится при помощи микроскопа, для чего материал, подлежащий обследованию, подвергается предварительной обработке с тем, чтобы сделать микробов ясно видимыми среди неорганизованного распада, в к-ром они обычно находятся. Достигается это окрашиванием препаратов из исследуемого материала различными естественными или искусственными красками. Так как мертвые микробы окрашиваются
6»1
лучше, то препараты предварительно подвергаются т. н. фиксированию, т. е. обработке разного рода физич. и хим. агентами, быстро убивающими протоплазму—■ жаром, спиртом и т. д. Иногда материал микроеко-пируется и без предварит, обработки, когда требуется по ходу анализа изучение под микроскопом живых микробов (наблюдение подвижности их, отношения к О и пр.). В таких случаях приготовляется препарат в виде т. н. висячей капли. Наблюдение ведется или обычным способом или при затемненном поле зрения микроскопа. При исследовании на присутствие Protozoa весь анализ ограничивается одним микроскопированием, что считается достаточным, т. к. методы культивирования протозоа очень сложны и в широкую практику еще не вошли. В бактериологии анализ не останавливается на изучении формы микроба. Необычайно широкая изменчивость бактерий при ничтожнейших изменениях окружающей среды, прежде всего отражается на форме их; изучение только одной формы микробов привело бы к грубейшим ошибкам при определении их вида. Поэтому, для суждения о виде микроба необходимо знание, кроме морфологии,—и всех его биол. особенностей, его биохим. и иммунологических свойств, а для патогенных—и результата опыта на животном; только совокупность всех этих данных дает возможность б. или м. точно идентифицировать того или иного микроба, определить вид и тип его. Этому и служит вся бактериологическая техника. Культивирование микробов на искусственных питательных субстратах для изучения их биохим. свойств является главнейшим моментом Б. а. В настоящее время такое культивирование встречает еще ряд затруднений. Многих микробов и теперь еще нельзя получить в искусственных культурах. Препятствием служит ряд условий, заключающихся в необычайном разнообразии микробного мира, в резко выраженной специфичности биохим. функций микробов и вытекающей отсюда их изменчивости. Наше незнание многих из этих условий не дает возможности подобрать такие питательные среды, к-рые всегда были бы пригодны. Тем не менее, именно культивирование доступных нам микробов является основным методом их Б. а. В наст, время Б. а. начинается с получения отдельных микробов, подлежащих изучению, в чистых культурах, т. е. в культурах, состоящих из одного вида микроба, без примеси какого-либо другого. Достигается это тем, что материал, подлежащий изучению, распределяется на поверхности твердых питательных сред. Это распределение имеет целью отделить микробов друг от друга. Через известный период времени, чаще всего через сутки, на тех местах субстрата, на которых оказались микробные клетки, образуются скопления микробов, т. н. колонии разросшегося микроба. Эти колонии у многих микробных видов имеют очень характерную форму, чем и пользуются для первого ориентирования в составе микробной флоры. Отдельные колонии извлекаются и переносятся на подходящие питательные среды для дальнейшего культи – вирования. Предполагается, что каждая колония вырастает из одной клетки; но это бывает не всегда, и последнее время все больше и больше в практику входит способ получения колоний из заведомо одной микробной клетки. Такое отделение микроба производится под контролем глаза в микроскопе с помощью прибора, называемого микроманипулятором. Т. к. материал, подлежащий обследованию, заключает в себе огромное количество разнообразных микробов, выделить же необходимо одного определенного из них, то в таких случаях применяются особые питательные среды. В последних или содержатся хим. вещества, вступающие между собой во взаимодействие под влиянием роста микробов, что обнаруживается каким-либо легко доступным п
роявлением, напр., изменением цвета, выпадением или растворением осадка (среды Эндо, Дригальского, среды с мелом, с кровью), или эти среды заведомо благоприятствуют росту искомого микроба и подавляют рост микробов сопутствующих, напр., среды обогащения для тифа, дифтерии. Только после такой предварительной обработки получают чистые культуры. В тех случаях, когда искомый микроб находится в исходном материале в очень незначительном количестве и трудно поддается непосредственному культивированию, прибегают к опыту на животных (tbc). Материал впрыскивают животному, и после того, как разовьются характерные для данного микроба пат. изменения, выделяют чистую культуру. Получив чистую культуру, приступают к изучению биохим. особенностей данного микроба. Т. к. состав питательных сред очень сложен, то для изучения биохимии к средам прибавляются различные, химически более простые вещества, изменения которых под влиянием роста микробов легко могут быть обнаружены прибавлением какого-либо индикатора—лакмуса, нейтраль-рота и др. Для этой цели служат различные углеводы, моно-, ди-, полисахариды и многоатомные спирты, а также желатина и кровь (эритроциты). На основании изменения того или иного из этих веществ заключают о биохимич. особенностях данного микроба. Громадное значение при определении вида микроба имеет иммунологический метод, основанный на способности животного организма крайне специфически реагировать на парэнтеральное введение инородных белков образованием и накоплением в крови различных т. н. антител. Сыворотка крови таких животных и служит реактивом. В ней присутствие этих антител легко может быть обнаружено рядом простых реакций. Некоторые из этих реакций получили широкое распространение и являются обязательными при идентификации микробных видов. Эти реакции—агглютинация, преципитация и реакция отклонения комплемента. Для непатогенных микробов Б. а. на этом может быть закончен. Для микробов же патогенных обязателен еще эксперимент на животном, особенно при обнаружении нового вида. Идеалом определения всякого патогенного микроба является получение у подходящего животного патологич. изменений, вызываемых данным микробом в естеств. условиях. Однако, наши знания необходимые для такого опыта условий далеко не полны, почему опыты и бывают часто безуспешными. Затем, пат.-анат. данные, полученные в результате опыта, не всегда могут быть достоверны, т. к. видимое здоровое состояние животного ничего не говорит о перенесенных им инфекциях и друг, заболеваниях; обнаруженные изменения, могут быть результатом уже ранее перенесенных заболеваний. Все эти соображения заставляют очень осторожно относиться к получаемым при эксперименте результатам и никогда не удовлетворяться одним удачным опытом. Все же в тех случаях, где реакция со стороны опытного животного по отношению к данному микробу строго определенна и постоянна (как, напр., отношение морской свинки к дифтерии или tbc, или кролика к оспе и бешенству), там эксперимент на животном является обязательным. Б. а. без такого эксперимента недостаточно убедителен. В нек-рых случаях при удачном опыте необходимо выделить в чистой культуре того микроба, который послужил для эксперимента, и идентифицировать его с исходным. Это необходимо потому, что часто введение в животный организм инородного материала пробуждает дремлющие там патогенные процессы и вызывает генерализацию ограниченного страдания, повышая активность находящихся там микробов. При выделении чистой культуры надо поэтому иметь в виду, что можно выделить не исходного микроба, а микроба, случайно находившегося в организме. Кроме того, кровь многих, видимо здоровых, животных содержит в себе различных микробов, к-рые также могут быть выделены и могут ввести в заблуждение исследователя. Общая схема хода Б. а. может быть представлена в таком виде: 1) изготовление препаратов из подлежащего обследованию материала; фиксация их; 2) микроскопирова-ние а) в неокрашенном виде, б) в окрашенном виде; 3) посев на агаровые пластинки для выделения чистой культуры; если необходимо, то после предварительного посева на избирательные или обогащающие среды; 4) биохим. анализ; 5) реакции иммунитета; 6) эксперимент на животных. Целью Б. а., кроме определения вида бактерии, служит и установление его места в систематике микробов. Однако, систематика микробов еще недостаточно разработана, вернее, существует несколько систематик, очень неполных, построенных на различных основах. Все это затрудняет точность анализа. В 1917 г. а
мериканские микробиологи создали специальную комиссию, к-рая и разработала систематику бактерий, базируясь, гл. обр., на их иммуно-биологических особенностях и свойствах, обнаруживаемых в культурах. Эта комиссия проверила характеристики всех известных микробов в указанном выше смысле, и результаты ее работ опубликованы. Все выходящие теперь на англ. яз. работы уже придерживаются номенклатуры, принятой в этом руководстве.
Лит.:
Златогоров С. И., Учение о микроорганизмах, П., 1914; Т а р а с е в и ч Л. А., Ме – дицинская микробиология, Киев, 1910; Омелян-с к и й В. Л., Основы микробиологии, М.—Л., 1926; К о 1 I e W. u. Wassermann A., Handbuch d. path. Mikroorg., В. I, 2 Ausg., Jena, 1912; К о 1 m e r J., Infection, immunity a. biologic therapy, L., 1924; Bergey H., Manual of determinative bacteriology, L., 1927; P a r k W. a. Williams A., Pathogenic microorganisms, N. Y., 1925; В e s s о n A., Technique microbiologique, P., 1925; Wadsworth A., Standard methods, N. Y., 1927. А. Челышй.